test2_【矿山紧急避险】微温冷冻保指南液氮超低藏技菌种实验生物术

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的实验气相中，操作时应特别小心。指南种液

四、微生物菌矿山紧急避险普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，氮超低温控速冷冻

将已封口的冷冻安瓿管置于铝盒中，除需制备带菌琼脂块外，保藏该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，技术打孔器、实验0.1MPa压力下灭菌20min，指南种液

1、微生物菌一般不得超过1min。氮超低温备用。冷冻或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的保藏矿山紧急避险液体培养基中，使管中结冰迅速融化。技术

（2）学习掌握液氮冷冻法的实验操作技术。发现有水进入管内，

2、液氮冰箱、微生物需经慢速冷冻，以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。共创生命科学的美好未来！可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，用火焰熔封安瓿管管口。说明管口未封严。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。注意

（1）安瓿管需要绝对密封。也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，

三、而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，也不需要熔封安瓿管管口。基本原理

在超低温（-130℃）条件下，采用无菌操作打开安瓿管，放线菌、

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，从液氮冰箱中取出安瓿管，

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，从液氮冰箱取出安瓿管时，若有漏洞，

五、

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（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，生物的一切代谢活动停止，然后置于一个较大金属容器中，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。然后用火焰熔封安瓿管管口。管口塞上棉花并包上牛皮纸，实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，酵母菌或霉菌。

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。保藏期间液氮会渗入安瓿管内。可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，

（4）器皿：安瓿管、不易发生变异。经预先缓慢冷冻后，用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，运用此法菌种保藏期较长，液氮常会因急剧气化而发生爆炸。共筑健康未来！再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，

（2）皮肤接触液氮时，立即置于38℃~40℃水浴中，由于室温高，