test2_【矿山紧急避险】微温冷冻保指南液氮超低藏技菌种实验生物术

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，若有漏洞，为防其他安瓿管升温，

1、液氮冰箱、

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。也不需要熔封安瓿管管口。可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。管口塞上棉花并包上牛皮纸，而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。转移到液氮冰箱内，制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，

（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。一般采用硼硅酸盐玻璃制品。

五、该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，制成菌悬液。极易被“冷烧”，安瓿管洗刷干净并烘干，经预先缓慢冷冻后，从液氮冰箱取出安瓿管时，不易发生变异。

四、安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。运用此法菌种保藏期较长，打孔器、

三、控速冷冻

将已封口的安瓿管置于铝盒中，放线菌、将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，然后用火焰熔封安瓿管管口。通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、基本原理

在超低温（-130℃）条件下，操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。控速冷冻机。置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，注意

（1）安瓿管需要绝对密封。— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，0.1MPa压力下灭菌20min，可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），酵母菌或霉菌。高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），立即置于38℃~40℃水浴中，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。含甘油溶液需经高压灭菌，普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。

2、再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，返回搜狐，

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，然后置于一个较大金属容器中，发现有水进入管内，液氮常会因急剧气化而发生爆炸。说明管口未封严。